外泌體分離方法之基于聚合物的沉淀法：基于聚合物的沉淀技術(shù)通常包括將生物流體與含聚合物的沉淀溶液混合、4℃孵育和低速離心。用于基于聚合物的沉淀的較常見聚合物之一是聚乙二醇(PEG)。這種聚合物的沉淀可以對分離的外泌體產(chǎn)生溫和影響而且可以產(chǎn)生中性的pH值。由此，出現(xiàn)了幾種常見的外泌體試劑盒：比如：SystemBiosciences,MountainView,CA,ExoQuick等。研究表明，使用ExoQuick方法可以快速執(zhí)行，無需額外設(shè)備，只需用高速離心機(jī)進(jìn)行超速離心可以獲得高產(chǎn)量的外泌體。但是此方法的缺點(diǎn)是：非外泌體材料對外泌體分離物的污染仍然是基于聚合物的分離方法的一個(gè)問題。此外，分離物中的聚合物可能會干擾下游分析。外泌體不是干細(xì)胞，是干細(xì)胞較精華的部分。天津血液DNA外泌體分離哪家好

CHO細(xì)胞外泌體的分離和表征：CHO細(xì)胞是一種普遍用于生物制藥蛋白質(zhì)生產(chǎn)的宿主。CHO細(xì)胞中分離外泌體主要采用聚合物的沉淀(PBP)技術(shù)從分批培養(yǎng)中分離和富集細(xì)胞外泌體囊泡。分離后的外泌體可以通過多種方法來檢測和表征分離的囊泡，這些分析包括動(dòng)態(tài)光散射(DLS)和Zeta電位測量、電子顯微鏡(EM)和外泌體標(biāo)記物分析、RNA和脂質(zhì)分析等。根據(jù)制造商的指南，使用TEI總外泌體分離試劑盒（Invitrogen）從培養(yǎng)基中分離外泌體。將細(xì)胞培養(yǎng)基以2000×g離心30分鐘以去除細(xì)胞和任何碎片；隨后將上清液小心移至離心管管中，加入0.5倍體積的TEI試劑，充分混合并在4°C下孵育過夜。然后將樣品在4°C下以10,000×g離心1小時(shí)，然后在棄去上清液后，將富含外泌體的顆粒重新懸浮在75μlPBS緩沖液中。然后將樣品儲存在-20°C下，直到需要進(jìn)行后續(xù)分析。青島上清外泌體企業(yè)分離樣品前的處理對較終外泌體分離的效果有較大影響。

外泌體衍生物miRNA的重要應(yīng)用：外泌體保護(hù)miRNA免于降解，使它們比游離miRNA更穩(wěn)定，并能被特定受體細(xì)胞有效整合。因此，在外泌體攜帶的貨物中，miRNA可以提供有關(guān)它們來源的細(xì)胞類型、靶標(biāo)和細(xì)胞狀態(tài)的身份信息。越來越多的證據(jù)表明，疙瘩細(xì)胞來源的外泌體已成為通過傳遞病miRNA促進(jìn)疙瘩細(xì)胞增殖、侵襲、血管生成、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和疙瘩微環(huán)境重塑的主要候選者。血管生成對于惡性疙瘩的生長和轉(zhuǎn)移至關(guān)重要，因?yàn)樾卵芸梢蕴峁╊~外的氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)，還可以清理廢物。比如：病細(xì)胞釋放外泌體exo-miR-21、exo-miR-23；外-miR-29；exo-miR-103和exo-miR-210可以促進(jìn)增殖、血管生成和疙瘩轉(zhuǎn)移。

外泌體的提取主要包括以下幾種方式。一是免疫磁珠法，這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整，特異性高、操作簡單、不需要昂貴的儀器設(shè)備，但是非中性pH和非生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性，不便進(jìn)行下一步的實(shí)驗(yàn)。二是PS親和法，該方法將PS（磷脂酰絲氨酸）與磁珠結(jié)合，利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。該方法與免疫磁珠法相似，獲得的外泌體形態(tài)完整，純度較高。由于不使用變性劑，不影響外泌體的生物活性，外泌體可用于細(xì)胞共培養(yǎng)和體內(nèi)注射。2016.9《ScientificReports》雜志發(fā)表了該方法較新數(shù)據(jù)，表明PS法可提取相當(dāng)高純度的外泌體。部分外泌體分離方法可能存在對外泌體結(jié)構(gòu)和元素的影響。

外泌體分離方法之篩分分離法:該技術(shù)是通過膜從生物液體中篩分外泌體并通過壓力或電泳進(jìn)行過濾來分離外泌體。篩分分離法的分離時(shí)間較短，但分離的外泌體純度卻處于較高的水平。篩分分離法的缺點(diǎn)在于分離的外泌體回收率較低。總之，細(xì)胞外泌體提取、外泌體分離在疙瘩等研究領(lǐng)域發(fā)揮著重要作用。細(xì)胞外泌體分離方法目前多數(shù)還是采用高速離心機(jī)進(jìn)行離心分離的技術(shù)方法，然而，其他幾種分離技術(shù)，如過濾法、免疫分離法和篩分法，雖然也能進(jìn)行外泌體分離，但每種方法都有其局限性，多數(shù)還是只應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)室、科學(xué)研究等領(lǐng)域。外泌體通過它們攜帶的間質(zhì)基質(zhì)組分，在宿主細(xì)胞中誘導(dǎo)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化等重要的生物學(xué)反應(yīng)。無錫上清外泌體企業(yè)

發(fā)現(xiàn)外泌體轉(zhuǎn)移可能為疾病治著和預(yù)后提供新的治著策略。天津血液DNA外泌體分離哪家好

分離外泌體的方法之超濾：它使用孔徑為50-450nm的膜過濾器從細(xì)胞碎片和較大的EV中分離外泌體。通過使用納米尺寸的濾膜，可以分離出目標(biāo)尺寸的外泌體。超濾法通常用作超速離心的后續(xù)步驟，以及凝膠過濾和色譜的較后一步。超濾可以通過切向流過濾（TFF）或直流過濾（DFF）方法進(jìn)行處理。DFF方法也稱為死端過濾，存在膜污染和顆粒分離受損的問題。此外，DFF只適用于小體積樣品，例如高達(dá)30mL的樣品。TFF也稱為錯(cuò)流過濾是一種更快速、高效和方便的分離大規(guī)模外泌體體積的過程，TFF是樣品流體切向流過濾膜并避免形成濾餅或堵塞的過程。天津血液DNA外泌體分離哪家好

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